外泌體分離提取方案。主要方案包括：

1、差速超1速離心法；

適用于細(xì)胞上清、灌洗液、尿液等大體積的樣品；

2、基于PEG沉淀原理的***盒法；

適用于血1清、腦脊液等小體積的樣品；

3、超濾提取法；

適用于***培養(yǎng)液或外泌體含量較低的樣品濃縮。亦可搭配超1速離心法，做進(jìn)一步的提取。

外泌體是細(xì)胞外囊泡的一種，其膜來源與粒徑范圍與細(xì)胞外囊泡相似，胞外囊泡電鏡檢測，電鏡下，顯示出典型的茶托狀超微結(jié)構(gòu)。實際操作中，通過常規(guī)的單一的方法很難鑒定外泌體。鑒定外泌體需要包含形態(tài)、粒徑、表面分子標(biāo)記物等多方面的鑒定。具體方法包括：透射電鏡（形態(tài)鑒定）、NTA檢測（粒徑及濃度鑒定）、WB（分子標(biāo)志物）。NTA檢測作為外泌體鑒定的經(jīng)典方法之一，可同時反映出檢測樣品的濃度及粒徑。質(zhì)量較好，純度較高的外泌體樣品，粒徑分布在30-150nm，原液濃度在10^9左右。為了保證檢測質(zhì)量，對每一個樣品，都會進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù)。檢測周期為2-3個工作日，可當(dāng)天到樣當(dāng)天出結(jié)果。

自噬是一個吞噬自身細(xì)胞質(zhì)蛋白或細(xì)胞器并使其包被進(jìn)入囊泡，并與溶酶體融合形成自噬溶酶體，降解其所包裹的內(nèi)容物的過程，借此實現(xiàn)細(xì)胞本身的代謝需要和某些細(xì)胞器的更新。自噬體，其直徑一般為 300 ~ 900 nm，平均 500 nm，囊泡內(nèi)常見的包含物有胞質(zhì)成分和某些細(xì)胞器如線粒體、內(nèi)吞體、過氧化物酶體等。與其他細(xì)胞器相比，自噬體的半衰期很短，只有 8 min 左右，說明自噬是細(xì)胞對于環(huán)境變化的有效反應(yīng)。

透射電鏡作為鑒定外泌體的金標(biāo)準(zhǔn)，一直是科銳諾生物主營的業(yè)務(wù)之一。透射電鏡點分辨率可以達(dá)到0.1nm，非常適合用來觀察外泌體類囊泡?？蛻糁恍枰乃托迈r或者凍存的外泌體樣品，我們負(fù)責(zé)從制片到觀察的***檢測服務(wù)。一個樣品提供2個放大倍數(shù)，10-15張照片。檢測周期為7個工作日。

　　在透射電鏡基礎(chǔ)上，用外泌體標(biāo)記蛋白對外泌體進(jìn)行免1疫標(biāo)記，利用膠體金標(biāo)記出外泌體表面的特定抗原的位置。結(jié)合透射電鏡形態(tài)學(xué)定性的特點，同時確定外泌體標(biāo)記蛋白的位置。這樣同時從形態(tài)學(xué)及免1疫學(xué)原理上驗證外泌體。這樣數(shù)據(jù)結(jié)果中既可以獲得經(jīng)典形態(tài)的外泌體，又可以定性及***外泌體表面的標(biāo)志蛋白。這樣具有更充分的說服力。

武漢科銳諾生物(多圖)-胞外囊泡電鏡檢測由武漢科銳諾生物科技有限公司提供。武漢科銳諾生物科技有限公司為客戶提供“外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)”等業(yè)務(wù)，公司擁有“科銳諾”等品牌，專注于技術(shù)合作等行業(yè)。，在湖北省武漢市江夏區(qū)神墩四路666號武漢國英種子A棟1樓的名聲不錯。歡迎來電垂詢，聯(lián)系人：王經(jīng)理。