難點(diǎn)與關(guān)鍵點(diǎn)

將灌注針插入主動(dòng)脈內(nèi)是灌注固定的關(guān)鍵，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型公司，也是難點(diǎn)。首先準(zhǔn)確找到主動(dòng)脈，這是此步驟的要點(diǎn)?？捎脺厣睇}水將胸腔內(nèi)的血液沖洗干凈，用鑷子輕輕夾住心 外膜（夾的越少越好，以免影響取材）將心臟向左上方提起，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，即可看清主動(dòng)脈，又可使灌注針很容易地插入主動(dòng)脈內(nèi)。插入時(shí)動(dòng)作要慢，針尖方向不要偏向右側(cè)，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，則將針退后、調(diào)整方向重新進(jìn)針，直到進(jìn)入主動(dòng)脈，灌注針進(jìn)入主動(dòng)脈后可在心臟的上方看到其位置，灌注針進(jìn)入主動(dòng)脈的長(zhǎng)度 好為 3~5 毫米，然后用絲線(xiàn)扎緊。切勿將灌注針?lè)旁谧笮氖覂?nèi)，臨床前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，這樣由于主動(dòng)脈瓣的關(guān)閉，灌注液很難進(jìn)入主動(dòng)脈，而是沿著心室的切口流出，致使灌注失敗。另 外，灌注針插入成功后，一定要用剪刀剪開(kāi)右心耳而不是右心室，這是灌流液的出口。剪開(kāi)心尖的位置一定要掌握好，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外包，不能偏右使灌注針插入右心室。

三、實(shí)驗(yàn)指標(biāo)區(qū)域指標(biāo)開(kāi)臂1停留時(shí)間、活動(dòng)路程、進(jìn)入次數(shù)、潛伏期、平均速度（X軸投影速度）開(kāi)臂2停留時(shí)間、活動(dòng)路程、進(jìn)入次數(shù)、潛伏期、平均速度（X軸投影速度）開(kāi)臂3停留時(shí)間、活動(dòng)路程、進(jìn)入次數(shù)、潛伏期、平均速度（X軸投影速度）其他臂停留時(shí)間、活動(dòng)路程、進(jìn)入次數(shù)、潛伏期、平均速度（X軸投影速度）四、實(shí)驗(yàn)方法及應(yīng)用

1) 動(dòng)物適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境1周后，稱(chēng)重，禁食24小時(shí)。此后每天訓(xùn)練結(jié)束后限制性地給予正常食料（據(jù)體重不同，大鼠16-20g，小鼠2-3g），以使體重保持在正常進(jìn)食大鼠的80%~85%。

2) 第二天，迷宮各臂及***區(qū)分撒著食物顆粒（每只4~5粒，直徑約3~4mm）。然后，同時(shí)將4只動(dòng)物置于迷宮***（通往各臂的門(mén)打開(kāi)）。讓其自由攝食、探究10min。

3) 第三天，重復(fù)第二天的訓(xùn)練。這一過(guò)程讓動(dòng)物在沒(méi)有很強(qiáng)的應(yīng)激條件下熟悉迷宮環(huán)境。

4) 第四天起，動(dòng)物單個(gè)進(jìn)行訓(xùn)練：在每個(gè)臂靠近外端食盒處各放一顆食粒，讓動(dòng)物自由攝食。食粒吃完或10min后將動(dòng)物取出。

5) 第五天，將食物放在食盒內(nèi)，重復(fù)前一天的訓(xùn)練，一天2次。

6) 第六天以后，隨機(jī)選4個(gè)臂，每個(gè)臂放一顆食粒；各臂門(mén)關(guān)閉，將動(dòng)物放在迷宮***；30s后，臂門(mén)打開(kāi)，讓動(dòng)物在迷宮中自由活動(dòng)并攝取食粒，直到動(dòng)物吃完所有4個(gè)臂的食粒。如經(jīng)10min食粒仍未吃完，則實(shí)驗(yàn)終止。每天訓(xùn)練兩次，其間間隔1h以上。

高架十字迷宮試驗(yàn) ：

EPM ) 既可以建立焦躁應(yīng)激的模型也是國(guó)際上公認(rèn)的經(jīng)典測(cè)量焦躁反應(yīng)的方法。其原理是利用動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境的探究特性和對(duì)高懸敞開(kāi)臂的恐 懼心理， 形成動(dòng)物的矛盾沖突來(lái)考察大鼠的焦躁?duì)顟B(tài)。 EPM 測(cè)試的項(xiàng)目中， 焦躁動(dòng)物的 OE% 和 OT% 會(huì)明顯降低， 經(jīng)典抗焦躁藥則使兩者升高， OE + CE 反映了動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)活性。本研究發(fā)現(xiàn)模型組大鼠的 OE% 和 OT% 顯著下降， 運(yùn)動(dòng)活性也降低。HD反映了動(dòng)物在非保護(hù)區(qū)內(nèi)的探索行為， 代表動(dòng)物對(duì)陌生環(huán)境的好奇探究或因恐懼而尋求逃避， 與焦躁程度有一定相關(guān)性， 本研究中空瓶應(yīng)激后的大鼠 HD行為減少; RR可用來(lái)觀察藥有無(wú)***作用及***強(qiáng)度。上述結(jié)果證實(shí)， 慢性應(yīng)激后的大鼠明顯處于焦躁?duì)顟B(tài)， 說(shuō)明慢性焦躁應(yīng)激大鼠模型的制備成功， 且通過(guò)量化的標(biāo)準(zhǔn)客觀反映出大鼠的焦l慮程度。

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