原位雜交雜交液注意事項：

       （1）雜交液內(nèi)除含一定濃度的標記探針外，還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等。

       （2）雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加，可以減低探針與組織標本之間的靜電結(jié)合。甲酰胺可使Tm降低，雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA：RNA，植物染色體原位雜交技術(shù)服務(wù)，RNA：DNA，DNA：DNA的雜交溫度降低0.35℃，0.5℃和0.65℃。，所以雜交液中加入適量的甲酰胺，可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標本的脫落。硫酸葡聚糖能與水結(jié)合，從而減少雜交液的有效容積，提高探針有效濃度，以達到提高雜交率的目的（尤其對雙鏈核酸探針）。

       在雜交液中加入牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等，都是為了阻斷探針與組織結(jié)構(gòu)成分之間的非特異性結(jié)合，以減低背景。

分子病理學(xué)診斷主要應(yīng)用于以下幾個方面：1、對于腫l瘤易感基因的檢測，對于腫l瘤高危人群的篩檢具有實用價值，如檢測GSTπ基因以判定個體暴露于致癌物是的致癌危險性。2、腫l瘤相關(guān)病毒的檢測，如采用原位雜交方法檢測標本中HPV、EBER等病毒。3、疑難腫l瘤的診斷和分類，尤其在鑒別診斷淋巴細胞增l生性疾病與淋巴細胞性腫l瘤上有著強大的特異性和可靠性。4、腫l瘤的個體化治l療，能夠根據(jù)腫l瘤發(fā)生l發(fā)展不同階段分子水平的特點，對腫l瘤的個體化和預(yù)見性治l療具有指導(dǎo)意義。5、腫l瘤的預(yù)后判斷，如采用熒光原位雜交技術(shù)（FISH）檢測HER-2基因在乳l腺l癌病例中的表達情況，配合術(shù)后治l療，指導(dǎo)臨床用藥選擇。


FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員，因其所用探針被熒光物質(zhì)標記（間接或直接）而得名，該方法在80年代末 被發(fā)明，現(xiàn)已從實驗室逐步進入臨床診斷領(lǐng)域?；驹硎菬晒鈽擞浀暮怂崽结樤谧冃院笈c已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性；通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象（即維持其原位）的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標記探針不對環(huán)境構(gòu)成污染，靈敏度能得到保障，可進行多色觀察分析，因而可同時使用多個探針，縮 短因單個探針分開使用導(dǎo)致的周期過程和技術(shù)障礙。


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