以合成寡核苷酸探針為例,該技術主要步驟為:首先使支持物羥基化,并用光敏保護基團將其保護起來。每次選取擇適當?shù)谋喂饽ぃ?mask )使需要聚合的部位透光,其它部們不透光。這樣,光通過蔽光膜照射到支持物上,替代肖特玻片廠家,受光部位的羥基解保護。因為合成所用的單體分子一端按傳統(tǒng)固相合成方法活化,另一端受光敏保護基的保護,所以發(fā)生偶聯(lián)的部位反應后仍舊帶有光敏保護基團。因此,每次通過控制蔽光膜的圖案(透光與不透光)決定哪些區(qū)域應被活化,以及所用單體的種類和反應次序就可以實現(xiàn)在待***點合成大量預定序列寡聚體的目的。





***芯片又稱為DNA微陣列(DNA microarray),為什么替代肖特玻片,可分為三種主要類型:1)固定在聚合物基片(尼龍膜,替代肖特玻片產(chǎn)品,纖維膜等)表面上的核酸探針或cDNA片段,通常用同位素標記的靶***與其雜交,通過顯影技術進行檢測。這種方法的優(yōu)點是所需檢測設備與目前分子生物學所用的顯影技術相一致,相對比較成熟。但芯片上探針密度不高,樣品和***的需求量大,定量檢測存在較多問題。
2.大規(guī)模***心片
大規(guī)模***芯片通常涉及***組規(guī)模與數(shù)量(一般大于10000個***),分別采用接觸式點樣、非接觸式點樣或者半導體技術制備樣品。接觸式點樣方法包括點樣元件或點樣元件中的液體和芯片基片間有直接接觸的各種方法。非接觸式芯片制備方法包括各種芯片制備中不需點樣元件和芯片基片間直接接觸的各種技術,北京替代肖特玻片,其樣頭的是以可控的方式從噴嘴中噴出小體積的液滴。半導體制備技術指借鑒計算機芯片制造業(yè)中的微型化加工方法的***芯片制備技術。***芯片的工作流程如下:
(1) 經(jīng)大規(guī)模PCR擴增獲得***cDNVA插入片段。
(2)用機械手將 PCR產(chǎn)物點在玻璃板上,變性、固定。
(3)分 別從不同或***中分離mRNA.反轉錄生成cDNA.
(4)用 不同的熒光染料標記不同或***的cDNA。
(5)將標記好的 cDNA與點好的芯片進行雜交。
(6)激光掃描芯片雜交結果, 計算機處理。
(7)分 析雜交數(shù)據(jù)。
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