




lncRNA測序
長鏈非編碼RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)一般是指長度大于200 nt的RNA,位于細胞核內(nèi)或胞漿中,不參與蛋白質編碼功能,以RNA形式在多種層面上(表觀遺傳調(diào)控、轉錄調(diào)控以及轉錄后調(diào)控等)調(diào)控***的表達水平,在生命活動中具有重要作用。
長鏈非編碼RNA測序(long non-coding RNA sequencing,lncRNA-Seq)是一種使用特定方法降低樣本中rRNA 的豐度,對富集到的 RNA進行文庫構建,再對高通量測序儀產(chǎn)出的數(shù)據(jù)進行信息分析的研究方法。lncRNA-Seq可一次性獲得樣本中全部的lncRNAs信息,對lncRNAs的類別、功能進行的深入分析,從而快速準確地獲得與特定生物學過程(例如發(fā)育、***等)相關 lncRNA信息。
轉錄組重測序
轉錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態(tài)下所能轉錄出來的所有mRNA的總和。轉錄組研究是***功能及***結構等研究的基礎,廣東pcr,通過新一代高通量測序,能夠快速的獲得某一物種特定***或在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉錄本序列信息,已廣泛應用于臨床診斷、基礎研究和研發(fā)等領域。
轉錄組Resequencing針對的是有參考***組的物種。用新一代高通量測序技術對某物種的特定***或細胞進行轉錄組測序,與參考***組比較,熒光定量pcr,可以得到***表達差異、可變剪接、融合***等遺傳調(diào)控信息。
RNA提取及注意事項
研究***的表達和調(diào)控時,pcr引物設計,需要從***或細胞中分離純化RNA。RNA質量的高低經(jīng)常影響RT-PCR、cDNA庫構建和Northern Blot等分子生物學實驗的成敗。
主要***
Trizol是一種新型總RNA抽提***,內(nèi)含異***胍等物質,能迅速破碎細胞,***細胞釋放出的核酸酶。
1.
Trizol***含有,具***性和刺激性,注重操作。
2.
RNase污染的主要來源是操作過程中手和空氣中的浮沉,注重配帶手套,樣品盡可能蓋嚴。
3. 細胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全會降低后得率,因為一部分RNA會殘留在未裂解的細胞中。細胞裂解之后要看不見顆粒狀物質(結締***和骨除外)。在清洗和裂解細胞時在低溫下操作,fish檢測,防止在操作過程中釋放的內(nèi)源RNase降解了RNA。
4. 酵母和一些***由于細胞壁的特別結構,可以加入Trizol***同時加入無RNase的玻璃珠并劇烈振蕩,使細胞裂解充分。
2-8℃ 避光保存一年。

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