細(xì)胞融合

取已免0疫小鼠的脾0臟用不完全培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)。收集選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的 SP2 /0 骨0髓瘤細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)。將 SP2 /0 骨0髓瘤細(xì)胞與免0疫小鼠的脾細(xì)胞以 1∶ 10 在 50% 的 PEG1500 作用下融合［8］。加 HAT 選擇培養(yǎng)基重懸混勻后滴入到鋪有飼養(yǎng)層細(xì)胞的 3 塊 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板。放入37 ℃ ，含 5% 的 CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

材料與方法

一、材料

AFP購(gòu)自上海領(lǐng)潮公司。SP2／0骨0髓瘤細(xì)胞(中科院上海細(xì)胞庫(kù))。8～12周齡Balb／c小鼠(第四軍0醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。SPF級(jí)。

二、方法

1．動(dòng)物免0疫：將4只8～12周齡Balb／c小鼠隨機(jī)分為兩組，每組2只，分別命名為1號(hào)和2號(hào)(第yi組)、3號(hào)和4號(hào)(第二組)。第yi組按常規(guī)免0疫方法進(jìn)行免0疫一…，第二組采用改良的免0疫方法進(jìn)行免0疫。免0疫前靜脈采集少量血液，析出血0清作為后續(xù)檢測(cè)的陰性對(duì)照血0清。

第yi組：AFP50ug(50肚1)與等量福氏完全佐劑(Sigma，美國(guó))混合，充分乳化后注入8～12周齡Balb／c小鼠腹腔，2周后用同量抗原加不完全福氏佐劑(Sigma，美國(guó))腹腔***，4周后用同量抗原加不完全福氏佐劑腹腔***，pei轉(zhuǎn)染***，融合前3 d作腹腔***加強(qiáng)免0疫。

腹0水的純化

采集復(fù)水后，12 000 r/min 離心 15 min，去掉 沉淀等雜質(zhì)。往離心后的腹0水中加入等體積的 PBS，并添加***銨固體至 50% 飽和，靜置 2 h，12 000 r/min離心15 min，棄 上 清，用 PBS 重 新 溶 解 沉 淀，然 后 再次加入***銨固體至 45% 飽和，靜置兩個(gè)小時(shí)左右，12 000 r/min 離心 15 min 棄去上清，用少量 PBS 溶解沉淀，即得到較純的抗0體，對(duì) PBS 透析除去***銨，透析時(shí)間為24 h，透析過(guò)程中更換透析液兩至三次。

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