




了解產(chǎn)品參數(shù)及價格,請百度搜索“博奧龍”,進入博奧龍官0網(wǎng),搜產(chǎn)品名稱即可報價信息。歡迎在咨詢~
博奧龍公司主要產(chǎn)品有抗0體制備全套產(chǎn)品、病毒包裝相關(guān)產(chǎn)品、2萬多種科研用抗原抗0體、1200多種二抗,涵蓋20多個物種和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等標(biāo)記二抗;品類齊全的內(nèi)參標(biāo)簽抗0體;另有WB、IHC、ELISA、細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑及諸多特色產(chǎn)品和特色技術(shù)服務(wù)。
實驗步驟:
1 、首先將ELISA試劑盒恢復(fù)室溫(大約30分),然后用純水把清洗液配成工作濃度(1份濃縮清洗液加19份純水)。
2 、取出酶標(biāo)板。每個標(biāo)本需要6孔,陽性對照6孔,陰性對照6孔。多余的用自封袋保存,記得放入干燥劑。
3 、將標(biāo)本檢測孔每孔先加入標(biāo)本稀釋液各50μl。然后將50μl 細(xì)胞培養(yǎng)上清(或特異親和純化的抗0體)再加入酶標(biāo)微孔板,每個標(biāo)本加6孔;陽性對照和陰性對照孔不加標(biāo)本稀釋液也是各加6孔每孔100μl。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。
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典型的G蛋白偶聯(lián)受體傳遞信號的基本原理是:特異性的配體結(jié)合到相應(yīng)的7次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)上,引起GPCR構(gòu)象的變化;構(gòu)象變化之后的GPCR能夠結(jié)合相應(yīng)的GDP結(jié)合狀態(tài)的三聚體G蛋白,并誘導(dǎo)三聚體的Ga 亞基構(gòu)象發(fā)生變化,制備服務(wù),釋放結(jié)合的GDP。處于空置狀態(tài)的Ga 亞基迅速與周圍環(huán)境中的GTP結(jié)合。結(jié)合了GTP的Ga 亞基立即與GPCR和Gbg亞基復(fù)合物分離(如圖)。自由的Ga 亞基和Gbg 亞基分別與下游的效應(yīng)蛋白結(jié)合,通過調(diào)控效應(yīng)蛋白的活性來實現(xiàn)信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)。Ga 亞基在同效應(yīng)蛋白結(jié)合的同時或者之后,水解結(jié)合的GTP成為GDP,于是Ga 亞基在自身的調(diào)節(jié)下關(guān)閉功能,回到非活性的GDP結(jié)合狀態(tài),并與Gbg 亞基形成三聚體,等待下一次信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。
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單克0隆抗0體的大量制備
單克0隆抗0體的大量制備重要采用動物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。
1、體內(nèi)誘生法 取Balb/c小鼠。
首先腹腔注0射0.5ml液體石臘或降植烷進行預(yù)處理。1-2周后,腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖,并產(chǎn)生和分泌單克0隆抗0體。約1-2周,可見小鼠腹部膨大。用注0射器抽取腹0水,即可獲得大量單克0隆抗0體。
2、體外培養(yǎng)法
將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中,雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克0隆抗0體,收集培養(yǎng)上清液,離心去除細(xì)胞及其碎片,即可獲得所需要的單克0隆抗0體。但這種方法產(chǎn)生的抗0體量有限。近年來,各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),大大提高了抗0體的生產(chǎn)量。
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